新冠灭活疫苗下游工艺解决方案
新冠灭活疫苗病毒灭活疫苗是最为成熟的疫苗生产技术，也是最传统的经典技术路线：即在体外培养新冠病毒，然后将其灭活，使之没有毒性，但这些病毒的“尸体”仍能刺激人体产生抗体，使免疫细胞记住病毒的模样。新冠病毒灭活疫苗生产流程主要包括：临床样品获取——稳定毒株细胞培养——病毒收获及澄清——病毒灭活——纯化——无菌处理——制剂——灌装，如图1。面对新冠病毒变异株，国内灭活疫苗已经开展了单价、Delta + Omicron 两价还有原型株+Delta + Omicron三价疫苗的研发工作,基本完全了临床前研究并且已经进行了生产验证。图1：新冠病毒灭活疫苗生产过程（来源：网络）新冠灭活疫苗生产工艺过程
1.细胞培养：新冠病毒及其变异株用Vero扩增。Vero细胞是贴壁依赖性型细胞，采用微载体反应器大规模培养，兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，且容易放大。细胞可贴附微球 2D 表面生长，1g的 Seplife LX-MC-Dex1微载体提供 4400 cm2的表面积给细胞贴附。图2：蓝晓科技细胞培养微载体用于Vero细胞培养细胞生长情况观察（新冠灭活疫苗生产中投入使用）2.病毒扩增（略)3.细胞收集：细胞接种病毒后，细胞90%以上出现细胞病变效应（CPE),而对照组正常时，用离心的方式收集细胞。4.细胞破碎：可以采用负20摄氏度反复冻融等方式破碎细胞，让细胞内的病毒释放出来。5.收获病毒：细胞破碎后，用离心的方式收获病毒上清液。6.灭活：加入5-30mg/L的β-丙内酯（BPL）在37度下处理2-24h。7.澄清：离心收集的病毒溶液后加入一定量的核酸酶处理30-60min后用微滤膜组件进行澄清处理。8.纯化：8.1.高倍浓缩加一步凝胶过滤层析纯化：澄清后的病毒用300KD的超滤膜组件，超滤伴随洗滤的方式浓缩30-50倍，并去除大量的水及培养基中组分，去除部分HCP。浓缩后用凝胶过滤层析介质Seplife 4FF一步层析纯化，一步层析即可去除大于99%的HCP及大于99%的BSA，如图4.图3：蓝晓科技Seplife 4FF纯化新冠灭活病毒色谱图图4：蓝晓科技Seplife 4FF填料纯化新冠灭活疫苗结果
8.2.多模式层析加凝胶过滤两步层析：澄清的病毒溶液先用多模式层析Seplife Suncore 700 流穿模式纯化，去除大量的HCP和BSA，流穿的病毒溶液再次加入核酸酶处理2h左右，进一步的降解残留的核酸，处理后再用凝胶过滤层析Seplife 4FF纯化，因第一步多模层析是已去除了大量的杂质，第二步凝胶过滤层析时只有少量杂质，凝胶过滤时可适当的加大上样量。图5：蓝晓科技多模式层析介质纯化病毒原理示意图8.3离子交换加凝胶过滤两步层析：澄清的病毒溶液先用QLarge Scale 离子交换填料吸附洗脱模式纯化，病毒和BSA结合在填料上，HCP等杂质流穿，洗脱时用不同的洗脱强度分别洗脱下来病毒和BSA，洗脱液在经凝胶过滤层析Seplife 4FF或者多模式层析Seplife Suncore 700流穿模式精细纯化即可。9.调整病毒粒子浓度及置换缓冲液:用超滤伴随洗滤的方式调整病毒粒子浓度及置换缓冲液。10.除菌过滤：用0.22um的滤芯除菌过滤。11.制剂化（略）。第二新冠灭活疫苗Delta + Omicron 两价还有原型株+Delta + Omicron三价疫苗等灭活疫苗，单个毒株灭活按上面的工艺制备，后面再以一定比例混合后制剂化，即可实现多价灭活疫苗。
{:5_186:} 好东西！
页:
[1]