洁净室清洁：正确的方法和确定效果

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     防止洁净室分类区域内的污染是一场持久战。清洁和消毒程序通过去除日常操作过程中引入分类区域的微生物和微粒来帮助减轻污染。一般来说，人被认为是洁净室内的第一大污染源，其次是进出分类区域的材料和设备。遵循适当的穿衣和无菌技术程序有助于减轻人为造成的污染。正确制定和实施的清洁和消毒程序是确保洁净室处于恒定控制状态的一个关键组成部分。

在制定和实施清洁和消毒计划时，必须考虑多个因素。为了确定将使用哪些清洁剂和消毒剂，公司必须确定工厂内的天然菌群。在清洁任何目标区域之前，在工厂中进行基线监测（也称为原位监测）以确保微生物可回收。了解自然存在的生物在为工厂选择合适的消毒剂方面起着重要作用。微生物对消毒剂的抵抗力可能会有很大差异。例如，植物细菌通常是一些最容易根除的微生物，而霉菌和细菌孢子是最难根除的一些微生物。

消毒剂的有效性取决于其内在的杀菌活性、消毒剂的浓度、接触时间、被消毒表面的性质、用于稀释消毒剂的水的硬度、表面上存在的有机物质的量、以及存在的微生物的类型和数量。选择消毒剂时要考虑的其它关键方面是应用方法、即用型还是浓缩型、腐蚀性如何以及消毒剂的轮换方式。美国药典(USP) <1072>消毒剂和防腐剂，建议使用杀孢子剂轮换消毒剂，通常每月或每周一次，但如果使用过于频繁，杀孢子剂可能会腐蚀某些类型的材料。选择消毒剂后，必须通过消毒剂功效研究对其进行评估以确定其有效性。

确定功效

消毒剂功效研究可能会较为复杂，其可包括以下标准：

• 消毒剂数量
• 表面材料数量
• 每种消毒剂的接触时间
• 需要包括在内的挑战生物的数量
  

然而，此类研究证明了消毒剂的杀菌、杀真菌和杀孢子功效，并且通常是行业监管机构所要求的。

消毒剂功效测试的概念是通过使用可以产生可测量结果的特定方法来挑战消毒剂。重要的是要保留从建造洁净室时开始的额外结构材料，以制作 2英寸乘 2英寸的试样，用于消毒剂功效研究。试样上接种足够的微生物，以证明霉菌和细菌孢子至少减少 2log，植物细菌减少 3 log。每种生物使用不同的试样，每种消毒剂使用预定的接触时间。

选择挑战微生物时，通常从 USP<1072> 中列出的微生物开始，例如金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、巴西曲霉、白色念珠菌、铜绿假单胞菌和沙门氏菌。这些生物代表了一系列不同的生物体，它们对消毒剂具有不同的抵抗力。然而，大多数研究倾向于通过选择在基线环境监测(EM) 和常规测试期间回收的一些生物体来扩大该列表。

一旦确定了标准，就可以开始消毒剂功效研究。该过程简要描述如下：应在研究前对试样进行灭菌，以避免被选择用作挑战生物的微生物之外的其它微生物污染。高压灭菌是一种典型的灭菌方法，但如果材料不适合高压灭菌，则必须使用替代灭菌方法。准备好后，用预定量的生物体接种在试样表面上，然后在ISO 5 环境中干燥指定的时间。之后将适当的消毒剂施加到每个接种的试样上，持续确定的接触时间。然后使用中和剂擦拭每个试样以停止消毒活性并回收任何存活的微生物。将拭子放入含有更多中和剂的试管中，并通过涡旋混匀以去除拭子中的生物体。对该试样洗液进行对数稀释，并通过倾板法或膜过滤将其涂布到适当的培养基上。将平板在指定的温度和持续时间下孵育，然后计数形成的菌落形成单位。通过将接种物试样对照计数板与来自试样溶液的板计数进行比较来计算减少百分比。分析这些结果以确定每个测试场景是否实现了最小对数降低。

一旦消毒剂研究成功完成，公司应将报告文件存档以备将来参考。应在标准操作程序中指定清洁和消毒分类区域的过程，并在每次过程完成时记录在案。一旦分类区域在日常使用中，清洁和消毒程序的有效性应通过环境监测程序定期监测。

环境监测（EM）

使用基于风险的方法来确定样本数量、应在分类区域内采集样本的位置以及采样频率，建立环境监测计划将有助于保持对分类空间的控制。失效模式和影响分析 (FMEA) 风险评估确定产品或工艺的实际和潜在失效模式。FMEA 既是一种定性和定量方法，它可以预测潜在的过程故障，并尝试提供缓解因素以降低这些故障的风险。FMEA风险评级来自三个方面：

• 发生：故障发生的可能性
• 严重性：参考故障的后果（对患者健康的影响、时间损失、产品损失）
• 检测：确定检测到故障的可能性（高检测等级可以减少高发生率）。
  

事件发生可以进一步细分为两个子类别：

• P1：与环境相关的微生物污染概率。难以清洁的区域、回风口附近的区域、人员和物资流通繁忙的区域以及与不受控制的空间相邻的区域。
• P2：与产品相关的微生物污染概率。诸如工艺时间长度、工艺关键性以及在P2 评分过程中将考虑重要产品活动的区域等因素。
  

这是由于污染风险的不同。产品风险和环境风险通常是相互排斥的，应分别评估。每个风险类别都有一个从 1到 4 的数值范围。

风险是通过将每个风险类别乘以创建风险优先级编号(RPN) 来确定的。因此，概率发生 (P1) x 概率发生 (P2) x 检测 x严重性 = RPN。

可以在没有环境监测（pre-EM）作为检测源的情况下确定风险优先级，然后在每个样本位置实施环境监测（post-EM）后进行评分，用于显示实施 EM以提高对微生物污染的检测后的风险降低。使用该系统对每个样本进行评分。

完成风险评估后，为性能确认 (PQ) 和常规 EM 生成示例位置图。性能鉴定方案应概括通常分类为ISO 5、7 或 8 的区域的必要确认活动。PQ测试确定被测区域是否按预期执行并满足方案中定义的标准，包括静态和动态条件。可以参考各种指导文件来确定活性空气和表面样品以及非活性颗粒的标准，例如 USP<1116>、欧洲附录 1 和 ISO 14644-1。

ISO-14644-1:2015 侧重于ISO 14644-1 表1中定义的空气洁净度分类，而 ISO 14644-1 严格针对非活微粒和房间分类，另外两个指导文件USP < 1116> 和欧洲附录 1，也提供了活性表面和空气样本的标准。如果使用这些文件中的标准，这些值通常将被视为PQ 和紧随其后的例行测试的行动水平。一旦积累了足够的历史数据（通常为一年），就可以建立警报级别，并且也可以根据这些数据修改行动级别。

PQ 通常遵循房间认证，由指定天数的静止（静态）条件和指定天数的运行（动态）条件组成。静态和动态条件测试的天数可能因公司的需要而异。EM通常包括非活性颗粒空气采样、活性空气采样和活性表面采样。每种采样类型的位置由风险评估确定，通常绘制在房间图上，以创建样本地图。使用胰蛋白酶大豆琼脂(TSA) 培养基和沙氏葡萄糖琼脂 (SDA) 培养基进行活性空气和表面采样。TSA 是为细菌生长而配制的广谱通用生长培养基，而 SDA 是为更好地检测真菌生长而配制的。这两种类型的培养基在指定的温度和持续时间下孵育，以促进采样时可能已经转移到培养基中的任何微生物的生长。在PQ 之后，实施常规 EM 计划将有助于持续监测任何不利的微生物趋势。常规测试将有助于持续监控清洁和消毒计划的有效性。实施洁净室计划的这些关键组成部分将有助于确保洁净室正常运行并将污染水平降至最低。

实施这些措施会产生一些成本和时间影响，但通过采取适当的步骤并在适当的时间实施这些关键部分，它们将有助于减轻洁净室区域内的污染。这些步骤对于维护合规的洁净室设施和帮助确保在其中制造的产品的完整性是必要的。


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原文：R. Burke, M.Prifti, Cleanroom Cleaning: Proper Methodology and Determining Efficacy. BioPharm International,2022, 35.