填补市场空白！汉逊酵母 HCP ELISA，破解表达系统药物质控...

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     汉逊酵母与毕赤酵母和酿酒酵母，来源于酵母的三大品系，但是交叉反应差别极大。针对部分表达困难的药物，汉逊酵母有着明显的优势。鉴于中国市场中，尚无汉逊酵母HCP检测试剂，赛唐生物开发汉逊酵母的专属HCP ELISA检测试剂盒，为该宿主表达系统的药物开发提供强力支持。
背景
汉逊酵母表达系统
     汉逊酵母来源于酵母，其分类特征在《高特异性酵母HCP ELISA方阵解决残留检测难题》文章中已有明确说明。汉逊酵母是多边形汉逊酵母的代表性菌株。除去制药工程使用表达疫苗和酶类之外，汉逊酵母在功能性食品发酵，化学品合成，如紫杉醇，阿拉伯糖等，也能发挥重要作用。其主要生长特点是甲基营养型、耐高温、耐高渗和具备氧化烃类的能力。
     其主要功能离不开真核细胞器的完整性，如线粒体、细胞核、过氧化物酶体和细胞核等，为分泌蛋白的修饰、折叠的发生提供反应区室，见图1[1]。

图1

电镜观察图。 缩写: N nucleus细胞核; M mitoehondrion线粒体; P peroxisome过氧化物酶体; V vacuole液泡. Marker：0.5 gin。

     鉴于汉逊酵母表达系统在表达水平、糖基化能力、分泌效率、培养成本、规模化生产、适用蛋白类型和糖基化改造难度等方面的优势。生物大分子药物在此平台上开发的趋势也逐步增加。已上市的疫苗和抗体有，HPV疫苗（馨可宁、希瑞适）、新冠重组蛋白疫苗（ZF2001）、新冠中和抗体（安巴韦/罗米司韦）等，见表1。所以，市场对汉逊酵母HCP检测试剂盒有持续迫切的需求。

表1

质控数据
     由于汉逊酵母与酿酒酵母，以及毕赤酵母都有很近的亲缘关系。所以，我们测试了汉逊酵母HCP Kit对酿酒酵母和毕赤酵母（X-SS，GS115）HCP的交叉反应，结果显示，汉逊酵母HCP Kit对后两者的交叉反应均小于3.3%，介于0.4%-3.3%之间。且本底控制效果优异，详见《本底“瘦身”计划：HCP ELISA开发记》。
     同时，汇总多批次实验，确定汉逊酵母HCP的线性范围，R²，质控参数，包括QL、DL、Recovery、CV等，见下表2-6、图2-5。主要特点包括但不限于特异性强、抗干扰强、定量限稳定、精密度高、背景干净。

表2

1.交叉反应

Hansenula polymorpha

图2

表3

2.抗干扰回收率(Recovery)

表4

3.最低检测限(DL)&最低定量限(QL)

Hansenula polymorpha ELISA

图3

表5

4.精密度(CV)

Hansenula polymorpha

图4

表6

5.超低Blank

HS Yesat HCP ELISA Blank OD Trend

图5

参考标准：
ICH Q6B: Specifications: Test Procedures and Acceptance Criteria for Biotechnological/Biological Products.
ICH Q7: Good Manufacturing Practice Guide for Active Pharmaceutical Ingredients.
ICH S6 (R1).
EMA: Guideline on Immunogenicity assessment of therapeutic proteins (2017).
FDA: Points to Consider in the Manufacture and Testing of Monoclonal Antibody Products (1997).
参考文献：
[1] Klaas Nicolay, et al. A 31 P NMR study of the internal pH of yeast peroxisomes. Archives of Microbiology. 1987. 147(1):37-41.