IND/BLA申报，宿主细胞蛋白工艺专属化考虑几何？

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01 国际金标准制定企业“Cygnus”
      赛唐生物经过15年的积累，形成的现货产品种类数量与Cygnus产品数量对比，见下表。“✓”蓝色框框，为上市现货产品。

表1

02 聚焦
     赛唐生物主要聚焦于最具备领域难度的宿主细胞蛋白（HCP）方向。到目前为止，赛唐生物已开发出的HCP产品涵盖原核、真核、酵母、昆虫和转基因5大类，细分为15系，共计40种，其中32种已在售，见表1。
宿主细胞蛋白的制备难度的核心原因分为3点：
     1.宿主细胞蛋白在不同的药物和纯化模式下，得到的杂质本身的物理化学性质、异质性特征完全不同，显著复杂于宿主DNA和RNA这类分子量在100-2000bp之间，具有单一理化性质、电荷特征、片段残留高度保守性质的杂质。见图1，左图为HCP三维复杂性展示，右图为HCD开发示意图。

图1

     2.宿主细胞蛋白需要收集上清、抗原浓缩、动物免疫、采集血清、纯化并标记抗体、验证抗体覆盖度、调试ELISA以及调整缓冲液以适应不同样本。若实验顺利，制备周期在6-9个月，反之则需要12-18个月，远高于HCD/HCR的1-2个月制备周期（含高通量测序、选择靶点、设计引物和QPCR调试）。见下图2。

图2

     3.宿主细胞蛋白是极端异质性，分子种类介于103-104种，等电点介于3-11，分子量介于5-400kda，翻译后修饰乙酰化、甲基化、磷酸化、糖基化，导致相同蛋白在修饰后表现出等电点与疏水差异，这是在不计算发酵工艺表达差异的条件下。即使是相同的发酵和纯化工艺，HCP残余种类也有较大差异，这也是监管机构要求对任何一个相同工艺都要做检测鉴定的原因。
     4.虽然Cygnus做了较多的样本适用，并具有较好代表性。但不可否认的是，任何药物尽管拥有相同的纯化工艺，却也存在HCP不同步的可能，残留HCP种类差异较大，这是多数药企做HCP检测时常遇到的问题。尽管针对应用最为广泛的 CHO 表达系统已有较为深入的研究，但大部分高风险宿主细胞蛋白（HCP）同工酶的功能机制仍未阐明，其在临床应用中带来的潜在远期副作用仍无法完全确定。
     5.宿主细胞蛋白的残余活性风险，识别出具有免疫原性、生物活性的高风险HCP，对其进行单独控制；而DNA只需要控制总残留量和片段大小，无需对特定DNA片段进行单独控制，因为宿主DNA的风险主要是整合的致癌风险，只要总残留量低于限值，片段大小符合要求，风险就可控。
03 专业
     1. 合规性：标准品定标，国家标准品溯源，见图4。
     原材料稳定性：抗体存储验证可以在-20℃保存20年。
     生产标准：生产按照ISO13485：2016医疗器械生产，CNAS第三方平台认证。见图3。
     支持审查：支持原始数据电子实验档案审查，支持验厂审计。

图3                                           图4

     2.HCP抗体制备系统化
     从HCP收集处理，到动物免疫、血液采集、抗体纯化、覆盖度验证、试剂盒调试，再到药物样本的适用性改造。目前赛唐生物已经通过上述完整流程成功制备出如“二”所述种属HCP，5类，15系，共计40种HCP。HCP产品的制备及检测系统，已得到多轮验证。见图5、6

图5                                          图6

     3.覆盖度专业化
     目前行业对于CHO HCP相关的高风险因子研究比较充分，有较多的参考。但是除CHO之外，还要有其他表达系统的HCP风险分析，如E.coli、毕赤酵母、酿酒酵母、汉逊酵母以及多种昆虫细胞HCP的分析能力。覆盖度实验流程涉及样本预处理、IEF和2D、银染或荧光标记等步骤，实验种类繁多。这种稳定的RSD，通常需要建立在独立稳定的专业技术人员基础之上。

表2

图7

4.HCP研究纵深
     赛唐生物从HCP功能与种类本身，到体内体外风险体系的探究。
     所谓的HCP并非完全的蛋白成分，其中仍然包含丰富的核酸、糖类、外泌体等杂质。赛唐生物均全部经过验证，完成较为全面的“HCP”成分研究。详见赛唐生物发表论文：《CHO-K1细胞培养上清及其外泌体的蛋白质组分析》。
     关于HCP在体内水平的毒理、肝肾功能、血常规的变化，以及对人体可能的副作用，赛唐生物在这些方面积累了相关的数据，为后续药物临床试验提供了研究基础。
见图8。

图8

04 团队品牌
     Cygnus公司是行业标杆，除了有先发优势外，还有着长期稳定核心团队的支撑。
     赛唐生物团队品牌，对比Cygnus有如下几点优势，见图9：
     1）张江品牌：2016-2026，十年张江深耕，从张江药谷的创新萌芽，到张江医谷的全链生长，再到浦东生命发展有限公司鼎力赋能的张江基因岛实现产业化升级，赛唐生物已成为张江集团孵化下的专业供应链特色成长性企业。
     从2026新年伊始，浦东新区政府召开闭门会：《聚张江 ·话药谷·共未来，2026张江药谷产业发展闭门交流会成功举行》，政企面对面，共谋产业未来发展，赛唐生物受邀，并积极响应互动；再到张江药谷提名推荐：《药谷新锐｜国产替代浪潮下的“隐形冠军”：赛唐生物加速重塑生物药安全检测产业格局》，《深化产业协作，共探生命科学新未来——热烈欢迎浦东生命科学产业公司领导一行莅临赛唐生物》；从团队组建，到技术开发软硬件资源，再到产品推广、政策扶持，赛唐生物点点滴滴的积累，都刻上了张江印记。

     2）专家领导：赛唐生物有着科研专家、创新药市场专家全力支持。深耕科研方向包含：生物制药、蛋白组学、免疫学、组织再生医学、生物传感器等领域。共计发表SCI 70+篇，核心专利20+。
     3）技术骨干：技术攻坚，要策略也要长期坚持，更需要点点问题积累与技术攻关。从抗原富集，到抗体开发与表征，最终的ELISA技术体系搭建，技术骨干在赛唐任职5年以上占比70%，10年以上任职≥30%，形成了强有力的协作团队。
     4）公司文化：技术沉淀需要稳定的技术人才，人才成长需要思路灌溉与培养锻炼，从前到后的自主发挥，一线人才的实践碰撞讨论，公司创始人对尝试错误的包容与耐心，浇筑了扎实的技术根基。赛唐生物既要发展壮大，也更要带领全体人员共赢未来。

图9

05 定制与通用HCP结果区别
     根据我们的定制经验，通用型HCP试剂盒抗体对多数终端产物的HCP识别在2000+种（含高风险HCP蛋白50-80种），而工艺专属型HCP抗体可识别HCP达到4000+种，通常可100%覆盖高风险HCP种类。
     见图11：黄色为高风险HCP，白色区为通用型HCP，绿色为工艺专属型HCP。
     另外在检测浓度上，通常也会有较为显著的区分（部分工艺特殊药物除外）。
     见图10：两款药物终产物（DS1：蓝色，DS2：绿色），Com组为Commercial，PS组为Process-Specific。
     由此我们可以观察到，工艺专属型HCP ELISA相较于通用型，对样本检测浓度提升4-5倍（注：覆盖度验证结果，如图11）。
     通常业内高风险HCP研究，主要聚焦于CHO表达系统，相对有较为充分的文献支持。赛唐生物有酵母类高风险HCP（毕赤/酿酒/汉逊）、E.coli和昆虫细胞高风险HCP相关数据，来支撑创新药特殊表达系统的风险研究。

图10

图11